脊髓性肌萎縮癥是一種高發病率並導致嬰兒致死
的常染色體隱形神經肌肉障礙疾病。肖銳著的《抑制
SMN2外顯子7剪接的調控蛋白的鋻定和作用機制研究
》通過初步的RNA干擾鋻定出了新的SMN2外顯子7剪接
的抑制因子hnRNP U，同時還發現了hnRNP U的一項新
功能——可變剪接調控因子，同時還發現它既調控
SMN2外顯子7剪接，也調控SMNl外顯子7剪接，並不響
應SMN2外顯子7上C到T的突變位點。本書還獲得了該
蛋白表達和被siRNA沉默的宮頸癌細胞中的轉錄組，
對數據的全面分析有望獲得該蛋白調控宮頸癌細胞可
變剪接的全貌。

第1章 引言
1.1 可變剪接調控的介紹
1.1.1 前體RNA可變剪接
1.1.2 剪接位點的識別和選擇
1.1.3 幫助剪接位點識別
1.1.4 抑制剪接位點識別
1.1.5 位置依賴性的剪接調控
1.1.6 RNA結構在可變剪接調控中的作用
1.1.7 蛋白因子調控可變剪接
1.1.8 轉錄偶聯的可變剪接調控
1.1.9 可變剪接和組織特異性
1.1.10 組成型剪接調控因子調控可變剪接
1.1.11 可變剪接與人類疾病
1.1.12 展望
1.2 SMA和SMN的介紹
1.2.1 SMA疾病的介紹
1.2.2 SMA疾病相關的SMN2外顯子7可變剪接的機制
1.2.3 SMA的治療方面的進展
1.3 hnRNP U的介紹
1.4 本課題的研究內容及意義
1.4.1 課題研究的內容
1.4.2 課題的研究意義
第2章 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 菌株、質粒及細胞繫
2.1.2 生化藥品及來源
2.1.3 細胞培養及操作相關的試劑
2.1.4 酶類和DNA marker，蛋白marker
2.1.5 抗體及其相關
2.1.6 ssRNA和siRNA合成
2.1.7 本研究所用引物
2.1.8 分析軟件和網絡資源
2.1.9 圖像編輯軟件
2.1.10 儀器
2.2 溶液的配制
2.2.1 細菌用抗生素的配制
2.2.2 蛋白純化中所用的緩衝液
2.2.3 DMEM細胞培養基的配制
2.2.4 細胞專用PBS的制備
2.2.5 細胞專用胰酶的配制
2.2.6 免疫沉澱及免疫印跡相關溶液的配方
2.3 方法
2.3.1 E.coli RNaseⅢ的制備和純化
2.3.2 人類RNA結合蛋白esiRNA庫的制備
2.3.3 細胞培養和轉染
2.3.4 免疫印跡
2.3.5 RT-PCR
2.3.6 Trizol中提取蛋白
2.3.7 突變克隆
2.3.8 克隆的構建
2.3.9 免疫共沉澱
2.3.10 RIP-PCR
2.3.11 免疫共定位
2.3.12 CLIP-seq實驗流程及注意事項
2.3.13 RNA-seq
第3章 結果與討論
3.1 RNAi篩選發現HnRNP U是一個新的抑制SMN2可變外顯子7剪接的剪接調控因子
3.2 hnRNP U沉默同樣會增強SMN1的剪接，暗示hnRNP U不是通過靶向外顯子7的C到T變化所產生的ESS而起作用的
3.3 hnRNP U抑制SMN2的剪接不依賴於任何已知的ISS
3.4 hnRNP U可能不是通過影響轉錄延伸來抑制SMN外顯子7的剪接的
3.5 hnRNP U在體外不與SMN2外顯子7及附近的內含子RNA結合，而在細胞內結合SMN2轉錄本
3.6 大規模篩選人類RNA結合蛋白發現了另外8個新的抑制SMN2外顯子7剪接的蛋白質，其中5個是與u2 snRNP相互作用的蛋白
3.7 hnRNP U與U2A：F65／35通過RNA依賴的方式相互結合，並協同調控SMN2外顯子7的剪接
3.8 CuP鋻定hnRNP U結合的RNA靶標
3.9 hnRNP U結合U2 snRNA，證明它是U2 snRNP的一個重要組分
第4章 研究工作總結和展望
4.1 工作總結
4.2 展望
參考文獻
縮寫索引
致謝