彼得?帕克（安德魯?加菲爾德飾）依然很忙，而格溫（艾瑪?斯通飾）畢業後考慮去牛津大學繼續深造。“電光人”（傑米?福克斯飾）出現後，生活更不得安寧。老朋友哈利?奧斯本（戴恩?德哈恩飾）回歸，帕克發現了關於自己身世的新線索。
花絮
.本片是首部完全在紐約拍攝的《蜘蛛俠》電影，也是在紐約拍攝的最大預算的影片。
.奧斯卡影帝傑米?福克斯在片中扮演的是電光人，奧斯卡最佳男配角克裡斯?庫珀扮演的是奧斯本，這是奧斯卡獲獎演員第一次扮演蜘蛛俠的死對頭。
.漫畫中，格溫被老綠魔（諾曼奧斯本）扔下布魯克林大橋。小蜘蛛發射蛛絲一下子拉住她，下墜的衝力將她的頸椎骨硬生生扯斷。格溫從此與世長辭。電影最後格溫穿了和漫畫中死亡場景一模一樣的衣服。
.謝琳?伍德蕾原本在片中扮演了瑪麗?簡的角色，並且還拍攝了一些鏡頭。但是在剪輯的時候，她的戲份全部被剪切掉了。原因是導演希望蜘蛛俠和格溫?斯黛西之間的愛情能保留到最後。
.馬克?韋伯在福克斯探照燈影業還有片約未完成。探照燈同意馬克?韋伯執導索尼的《蜘蛛俠》，但條件就是要幫《X戰警》宣傳一下，所以就有了今年《X戰警》的這個彩蛋。國內版無該片尾彩蛋。
.在電梯前支走Max去修電路的那名Oscorp員工，Max管他叫“斯邁思”（Smythe）。漫畫中Smythe是“蜘蛛殺手”的創造者，後來他改造自己的身體，成為了“終極蜘蛛殺手”。
.Oscorp那名低調的秘書Felicia就是漫畫中的黑貓，一個魅惑的亦正亦邪的角色，Peter在作為蜘蛛俠時的曖昧對像。
.Oscorp的地下倉庫除了小綠魔和犀牛人的盔甲還有禿鷲和章魚博士的裝備。章魚博士、禿鷲、電光人、獵人克拉文、致幻客與沙人在漫畫中合稱“Sinister Six”（邪惡六人組）。
.Peter的手機鈴聲是老版蜘蛛俠第一部中在地鐵站扛著吉他賣藝的那哥們兒唱的歌“Spiderman”。 此旋律最初出處為1967年動畫版蜘蛛俠的主題曲。
